fa بیان ترشحی آنزیم تجزیه کننده ترکیبات ارگانوفسفره با کاربرد نظامی و صنعتی در باکتری باسیلوس سوبتیلیس تخصصي Special پژوهشي Research <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">مقدمه</span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">: ارگانوفسفات نام عمومی </span></span><a href="https://fa.wikipedia.org/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B1_(%D8%B4%DB%8C%D9%85%DB%8C)" title="استر (شیمی)"><span style="text-decoration-line:none;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14pt;">استرهای</span></span></span></span></a>&nbsp;<span dir="LTR"><a href="https://fa.wikipedia.org/wiki/%D8%A7%D8%B3%DB%8C%D8%AF_%D9%81%D8%B3%D9%81%D8%B1%DB%8C%DA%A9" title="اسید فسفریک"><span dir="RTL" style="text-decoration-line:none;"><span style="color:windowtext;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14pt;">اسید فسفریک</span></span></span></span></a></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;"> است که در زمینه های مختلف بخصوص حوزه نظامی کاربرد دارند. با توجه به اینکه تولید و استفاده از سلاح های شیمیایی در جنگ های نوین چشمگیر می باشد، لذا مطالعه و پژوهش در زمینه شناسایی، پیشگیری و درمان آلودگی با این ترکیبات امری ضروری است. این ترکیبات اثرات منفی زیادی بر سیستم بیولوژیک بدن موجودات زنده دارند.<a name="OLE_LINK28"></a><a name="OLE_LINK27"> مطالعات نشان داده تجزیه بیولوژیک این ترکیبات بهینه ترین روش برای امحای این ترکیبات است. &nbsp;آنزیم های مختلفی از جمله آنزیم </a></span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">opdB</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">، برای تجزیه این ترکیبات شناسایی شده اند</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">مواد و روش ها</span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">: ژن این آنزیم با</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;"> تکنیک </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PCR</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;"> از ژنوم باکتری لاکتوباسیلوس برویس </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">ATCC367</span></span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">تکثیر شد. محصول </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PCR</span></span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">بدست آمده در وکتور </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">pWB980</span></span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">کلون گردید. سوش باکتریایی باسیلوس سوبتیلیس مستعد با وکتور نوترکیب ترانسفرم شدند. بیان ترشحی پروتئین در محیط بسیار غنی با تکنیک&nbsp;</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">SDS- PAGE</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;"> بررسی شد. فعالیت آنزیم به کمک اندازه گیری جذب ترکیب ارگانوفسفره کلروپیریفوس</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;"> مصرفی و تخمین میزان مصرفی آن در مدت زمان تعیین شده در طول موج 276 نانومتر</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;"> بررسی شد.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">نتایج</span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">: باند پروتئینی 27 کیلودالتون بر روی ژل </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:14.0pt;">SDS-PAGE</span></span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">مشاهده شد. فعالیت آنزیم </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:14.0pt;">Unit/mL</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;"> 83/10 تخمین زده شد.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">بحث</span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">: سوش نوترکیب حاصل، قادر به تولید ترشحی آنزیم کارآمد و فعال می باشد.</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;"></span></span> <strong>Introduction</strong>: Organophosphate is the common name for phosphoric acid esters that are used in various fields, especially in military productions<span dir="RTL">.</span> Considering the production and use of chemical weapon in recent wars, researches for identifying, preventing and treating pollution with these compounds is essential. These compounds have a lot of negative effects on the biological system. Studies have shown that the biodegradation of these compounds is the most effective method for eliminating these compounds. Various enzymes including the opdB enzyme have been identified for the degradation of these compounds.<br> <strong>Method</strong>: The opdB gene was amplified by PCR from the genome of Lactobacillus brevis ATCC367. The PCR product was cloned in pWB980 vector. Susceptible B. subtilis WB800 strains were transformed by recombinant vector. Secretion expression of protein in superrich medium was investigated using SDS PAGE technique. The enzyme activity was determined by a spectrophotometeric method using chlorpyrifos as the substrate.<br> <strong>Result</strong>: When we analyzed protein fractions with SDSPAGE, a 27 kDa protein band was presented. Enzyme activity was estimated at 10/83 unit/mL.<br> <strong>Discussion</strong>: The results show that the recombinant strain is capable of producing an efficient and active secretory enzyme. ترکیبات ارگانوفسفره, B. subtillis WB800, بیان ترشحی, آنزیم opdB organophosphorous, , B. subtillis WB800, secretory expression, opd B enzyme 25 30 http://npwjm.ajaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-139&slc_lang=fa&sid=1 فرشاد نجومی 10031947532846001774 10031947532846001774 No حمید مرادی فیروزجاه 10031947532846001775 10031947532846001775 Yes