fa طراحی پرایمرهای اختصاصی برای تشخیص درون‌آزمایشگاهی (In-house) انتاموبا هیستولیتیکا، انتاموبا دیسپار و انتاموبا ماشکوفسکی تخصصي Special كاربردي Applicable <span style="font-size:11pt"><span style="background:white"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">مقدمه</span></span></span></b><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">: آمیبیازیس که توسط انگل تک‌یاخته‌ای روده‌ای</span></span></span>&nbsp;<i><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">انتاموبا هیستولیتیکا</span></span></span></i>&nbsp;<span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">ایجاد می‌شود. تمایز دقیق بین گونه‌های انگل برای مدیریت بالینی مناسب بسیار مهم است. امروزه استفاده از روش های مولکولی به یکی از ایزارهای مهم در تفکیک گونه ها تبدیل شده است.این مطالعه با هدف توسعه یک روش درون‌آزمایشگاهی</span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115"> (in-house)</span></span></span><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">، ساده و کارآمد که برای آزمایشگاه‌های دارای حداقل تجهیزات مولکولی مناسب باشد و به عنوان یک آزمایش غربالگری کم‌هزینه برای شناسایی این آمیب‌ها عمل کند، انجام شد</span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">.</span></span></span><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115"></span></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="background:white"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">روش کار:</span></span></span></b><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115"> یک مجموعه پرایمر اختصاصی هر گونه بر اساس ژن</span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115"> 18S rRNA </span></span></span><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">برای تمایز <i>بین انتاموبا هیستولیتیکا</i>،</span></span></span>&nbsp;<i><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">انتاموبا دیسپار</span></span></span></i>&nbsp;<span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">و <i>انتاموبا موشکوفسکی</i></span></span></span><i>&nbsp;</i><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">با استفاده از ابزارهای بیوانفورماتیک طراحی شد. در مرحله بعد کارایی، ویژگی و حساسیت این پرایمرها با استفاده از نمونه‌هایی که قبلا در مطالعات شناسایی شده بودند، شامل سویه</span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115"> HM-1:IMSS</span></span></span><i><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">انتاموبا هیستولیتیکا</span></span></span></i><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">،</span></span></span>&nbsp;<i><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">انتاموبا دیسپار</span></span></span></i>&nbsp;<span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">و <i>انتاموبا موشکوفسکی</i> بررسی گردید. بدین منظور ابتدا </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">DNA</span></span></span><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115"> انگل های فوق جدا شده و هم با </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">PCR</span></span></span><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115"> معمول و هم </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">Real-time PCR</span></span></span><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115"> پرایمرها ارزیابی گردیدند.</span></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="background:white"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">یافته ها:</span></span></span></b><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115"> پرایمرهای توسعه‌یافته در این مطالعه موفق به تشخیص گونه‌های <i>انتاموبا</i> شدند و می‌توانند برای تمایز گونه های <i>انتاموبا</i></span></span></span>&nbsp;<span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">در موارد مثبت میکروسکوپی مورد استفاده قرار گیرند. پرایمرها به‌طور موثر گونه‌های هدف را با حد تشخیص 10 تروفوزوئیت در هر گرم مدفوع و ۵/۲ تروفوزوئیت در هر میلی‌لیتر آب شناسایی کردند. </span></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="background:white"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">نتیجه گیری: با توجه به نتایج حاصله، می توان از این پرایمرها جهت تشخیص سریع و همچنین &nbsp;در مطالعات آتی به عنوان پروب برای توسعه کیت‌های تشخیصی کمی و دقیق‌تر مناسب برای کاربردهای تشخیص</span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">&nbsp;<i>in vitro</i>&nbsp;</span></span></span><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="color:#0f1115">مورد استفاده قرار گیرند</span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">.</span></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <br> &nbsp; <span style="font-size:11pt"><span style="background:white"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span lang="EN" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">Introduction</span></span></span></b><span lang="EN" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">: Amoebiasis is caused by the intestinal protozoan parasite <i>Entamoeba histolytica</i>. Accurate differentiation between parasite species is crucial for appropriate clinical management. Nowadays, the use of molecular methods has become one of the important tools in species differentiation. This study aimed to develop a simple, efficient, in-house method that is suitable for laboratories with minimal molecular equipment and serves as a low-cost screening test for the identification of these amoebae.</span></span></span><span style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115"></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="background:white"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span lang="EN" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">Methods</span></span></span></b><span lang="EN" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">: A species-specific primer set based on the 18S rRNA gene was designed to differentiate between Entamoeba histolytica, <i>Entamoeba dispar</i> and <i>Entamoeba </i></span></span></span><i><span style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">moshkovskii</span></span></span></i><span lang="EN" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115"> using bioinformatics tools. In the next step, the efficacy, specificity and sensitivity of these primers were investigated using samples that had been previously identified in studies, including the HM-1:IMSS strain of <i>Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar</i> and <i>Entamoeba </i></span></span></span><i><span style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">moshkovskii</span></span></span></i><span lang="EN" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">. For this purpose, DNA of the above parasites was first extracted and evaluated by both conventional PCR and Real-time PCR primers.</span></span></span><span style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115"></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="background:white"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span lang="EN" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">Results: </span></span></span></b><span lang="EN" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">The primers developed in this study were successful in detecting <i>Entamoeba</i> species and can be used to differentiate Entamoeba species in microscopically positive cases. The primers effectively identified the target species with a detection limit of 10 trophozoites per gram of feces and 2.5 trophozoites per milliliter of water.</span></span></span><span style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115"></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="background:white"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span lang="EN" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">Conclusion: </span></span></span></b><span lang="EN" style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115">According to the results, these primers can be used for rapid detection and also in future studies as probes for the development of more accurate and quantitative diagnostic kits suitable for in vitro diagnostic applications.</span></span></span><span style="font-size:14.0pt"><span segoe="" style="font-family:" ui=""><span style="color:#0f1115"></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <br> &nbsp; انتاموبا هیستولیتیکا,انتاموبا دیسپار, انتاموبا موشکوفسکی, تشخیص مولکولی Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar, Entamoeba moshkovskii, Molecular identification 22 29 http://npwjm.ajaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5075-1&slc_lang=fa&sid=1 Minoo Shaddel مینو شاد دل 10031947532846007660 10031947532846007660 No Infectious Diseases Research Center, AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران. Mohammad Rajabloo محمد رجبلو rajabloo.mohammad@gmail.com 10031947532846007661 10031947532846007661 Yes Department of Parasitology, Faculty of Medicine, AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه انگل‌شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران. Mohammad Foad Heydary محمد فواد حیدری 10031947532846007662 10031947532846007662 No Research Center for Cancer Screening and Epidemiology, AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات غربالگری و اپیدمیولوژی سرطان، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران Mohamad Mohsen Homayoni محمد محسن همایونی 10031947532846007663 10031947532846007663 No Department of Parasitology, Faculty of Medicine, AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه انگل‌شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران. Javid Imani Azadtalab جاوید ایمانی ازاد طلب 10031947532846007664 10031947532846007664 No Department of Parasitology, Faculty of Medicine, AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه انگل‌شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران.